產(chǎn)品名稱(chēng)：原代食管癌條件重編程培養(yǎng)基(Human Esophagus Carcinoma Conditional Reprogramming Medium)
產(chǎn)品說(shuō)明：原代食管癌條件重編程培養(yǎng)基（Human Esophagus Carcinoma Conditional Reprogramming Medium）是一種為促進(jìn)食管鱗癌原代細(xì)胞體外生長(zhǎng)而設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基。它是一種無(wú)菌的液體混合系統(tǒng)，含有必需和非必需的氨基酸、維生素、有機(jī)和無(wú)機(jī)化合物、激素、生長(zhǎng)因子、微量礦物質(zhì)等。該培養(yǎng)基產(chǎn)品基于碳酸氫鹽的緩沖體系，在5%CO2/95%空氣的培養(yǎng)箱中平衡時(shí)，pH值為7.4。該培養(yǎng)基的配方可以提供一個(gè)理想平衡的營(yíng)養(yǎng)環(huán)境，選擇性地促進(jìn)體外人食管鱗癌原代細(xì)胞的生長(zhǎng)。

產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)：
(1) 培養(yǎng)成功率高

(2) 體外持續(xù)擴(kuò)增

(3) 保持腫瘤原始病理特征

(4) 藥敏結(jié)果宇臨床數(shù)據(jù)接近

使用說(shuō)明
?使用前準(zhǔn)備
（1）y射線照射過(guò)的NIH-3T3細(xì)胞（40Gy輻照）。
（2）15mL無(wú)菌離心管、移液器、移液管、無(wú)菌槍頭等表面消毒后放入超凈工作臺(tái)中紫外照射30min。提前30min從4℃冰箱取出原代細(xì)胞培養(yǎng)基平衡至室溫。
?食管癌原代細(xì)胞培養(yǎng)
（1）初次分離的食管癌小樣本細(xì)胞懸液一般無(wú)需計(jì)數(shù)，直接種入12孔板中。
（2）食管癌術(shù)中樣本過(guò)70微米篩網(wǎng)后計(jì)數(shù)，按照表1中細(xì)胞數(shù)接種在合適的培養(yǎng)器皿中，加入y射線輻照后的NIH-3T3細(xì)胞（添加滋養(yǎng)細(xì)胞數(shù)量如表1和表2所示）。
（3）原代細(xì)胞初次接種后2-3天勿動(dòng)（利于細(xì)胞貼壁），培養(yǎng)過(guò)程中若培養(yǎng)基顏色變黃但細(xì)胞未長(zhǎng)滿時(shí)可換半液，鏡下觀察細(xì)胞未長(zhǎng)滿但3T3細(xì)胞已不足時(shí)，適量補(bǔ)充γ射線輻照后的3T3細(xì)胞（一般補(bǔ)加初始數(shù)目的一半）。

注∶針對(duì)實(shí)體瘤樣本，細(xì)胞粒徑大于10微米進(jìn)行計(jì)數(shù);倍增時(shí)間>48小時(shí)則定義為增殖較慢的細(xì)胞;對(duì)于增殖較快細(xì)胞，可以綜合倍增時(shí)間、接種器皿的規(guī)格以及培養(yǎng)周期來(lái)估算接種的細(xì)胞數(shù)量;表格供參考，具體實(shí)驗(yàn)具體對(duì)待。
?食管癌原代細(xì)胞傳代
(1) 鏡下觀察細(xì)胞形成克隆，且匯合度達(dá)到80~90%時(shí)即可傳代。
(2) 培養(yǎng)箱中取出細(xì)胞，棄舊培養(yǎng)液，0.25%胰酶洗滌30秒后吸盡，再加入適量0.05%胰酶，37℃孵育，5 min后拿出輕拍培養(yǎng)瓶/板側(cè)面，顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況。
(3) 細(xì)胞消化至細(xì)胞變圓并開(kāi)始脫落時(shí)用終止培養(yǎng)基終止消化，并將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至離心管中，1500rpm離心3 min。
(4) 棄上清，以1-2mL相對(duì)應(yīng)的原代細(xì)胞培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，活細(xì)胞計(jì)數(shù)，將細(xì)胞懸液按適合的細(xì)胞密度接種于培養(yǎng)瓶/板，加入y射線輻照后的NIH-3T3細(xì)胞（不同規(guī)格培養(yǎng)瓶/板底面積、接種原代細(xì)胞數(shù)量、添加滋養(yǎng)細(xì)胞數(shù)量如表1或表2所示）。
(5) 補(bǔ)加原代細(xì)胞培養(yǎng)基至所需體積，輕輕搖晃混勻，表面消毒后置培養(yǎng)箱，37℃、5%CO2條件培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)：

1.本產(chǎn)品在使用前需平衡至室溫。
2.本產(chǎn)品中含有胎牛血清和原代細(xì)胞專(zhuān)用抗生素，如無(wú)特別需要不用額外再添加血清和雙抗，可直接使用。
3.為保持本產(chǎn)品的理想使用效果，不宜將其過(guò)夜放置于室溫或較高的溫度環(huán)境中。
4.請(qǐng)于保質(zhì)期內(nèi)使用本產(chǎn)品，超出保質(zhì)期，必須放棄使用。
5.原代細(xì)胞初次接種時(shí)會(huì)貼壁較慢和貼壁不牢，若無(wú)必要，盡量減少取出觀察的次數(shù)，建議2-3天一次。
6.傳代消化時(shí)切記不要消化過(guò)度，對(duì)細(xì)胞造成損傷，影響細(xì)胞狀態(tài)。
7.接種細(xì)胞時(shí)注意細(xì)胞密度，不可過(guò)稀或過(guò)密。
8.樣本需為食管鱗癌術(shù)中或內(nèi)鏡樣本，且腫瘤細(xì)胞比例越高（至少>50%），培養(yǎng)成功率越高，不推薦用于少量樣本（如循環(huán)腫瘤細(xì)胞）的培養(yǎng)。
9.使用產(chǎn)品時(shí)應(yīng)注意無(wú)菌操作，避免污染。
10.本產(chǎn)品僅用于科研用途，不能用于體外診斷。