產(chǎn)品名稱(chēng)：原代乳腺上皮細(xì)胞條件重編程培養(yǎng)基(Human Mammary Epithelial Cell Conditional Reprogramming Medium)
產(chǎn)品說(shuō)明：原代乳腺上皮細(xì)胞條件重編程培養(yǎng)基（Human Mammary Epithelial Cell Conditional Reprogramming Medium）是一種為促進(jìn)乳腺原代細(xì)胞體外生長(zhǎng)而設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基。它是一種無(wú)菌的液體混合系統(tǒng)，含有必需和非必需的氨基酸、維生素、有機(jī)和無(wú)機(jī)化合物、激素、生長(zhǎng)因子、微量礦物質(zhì)等。該培養(yǎng)基產(chǎn)品基于碳酸氫鹽的緩沖體系，在5%CO₂/95%空氣的培養(yǎng)箱中平衡時(shí)，pH值為7.4。該培養(yǎng)基的配方可以提供一個(gè)理想平衡的營(yíng)養(yǎng)環(huán)境，選擇性地促進(jìn)體外人乳腺原代細(xì)胞的生長(zhǎng)，實(shí)現(xiàn)體外培養(yǎng)周期短、成本可控、操作便捷的目的。

產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)：
(1) 培養(yǎng)成功率高

(2) 體外持續(xù)擴(kuò)增

(3) 保持腫瘤原始病理特征

(4) 藥敏結(jié)果宇臨床數(shù)據(jù)接近

使用說(shuō)明
?使用前準(zhǔn)備
(1) y射線照射過(guò)的NIH-3T3細(xì)胞（40Gy輻照）。
(2)15mL無(wú)菌離心管、移液器、移液管、無(wú)菌槍頭等表面消毒后放入超凈工作臺(tái)中紫外照射30min。提前30min從4℃冰箱取出原代細(xì)胞培養(yǎng)基平衡至室溫。
?乳腺原代上皮細(xì)胞培養(yǎng)
(1)人乳腺組織經(jīng)消化酶消化后，經(jīng)100微米篩網(wǎng)過(guò)濾后計(jì)數(shù)，按照表1中的細(xì)胞數(shù)接種在合適的培養(yǎng)器皿中，加入y 射線輻照后的NIH-3T3細(xì)胞（添加滋養(yǎng)細(xì)胞數(shù)量如表1和表2所示）。
(2)原代細(xì)胞初次接種后2-3天勿動(dòng)（利于細(xì)胞貼壁）），培養(yǎng)過(guò)程中若培養(yǎng)基顏色變黃但細(xì)胞未長(zhǎng)滿(mǎn)時(shí)可換半液，鏡下觀察細(xì)胞未長(zhǎng)滿(mǎn)但3T3細(xì)胞已不足時(shí)，適量補(bǔ)充y射線輻照后的3T3細(xì)胞（一般補(bǔ)加初始數(shù)目的一半））。

注∶以上表格僅供參考。倍增時(shí)間>48小時(shí)則定義為增殖較慢的細(xì)胞∶對(duì)干增殖較快細(xì)胞.可以綜合倍增時(shí)間、接種器皿的規(guī)格以及培養(yǎng)周期來(lái)估算接種的細(xì)胞數(shù)量。具體實(shí)驗(yàn)需按具體情況對(duì)待。
?乳腺原代上皮傳代
(1)鏡下觀察細(xì)胞形成克隆，且匯合度達(dá)到80~90%時(shí)即可傳代。
(2)培養(yǎng)箱中取出細(xì)胞，棄舊培養(yǎng)液，0.25%胰酶洗滌30秒后吸盡，再加入適量TrypLE™ Express酶 (Gibco#12605010)，37℃孵育，10-20min后拿出輕拍培養(yǎng)瓶/板側(cè)面，顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況。
(3)待消化至細(xì)胞變圓并開(kāi)始脫落時(shí)用含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基終止消化，并將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至離心管中， 300g, 5min離心。
(4)棄上清，以1-2mL本細(xì)胞培養(yǎng)基產(chǎn)品重懸細(xì)胞，活細(xì)胞計(jì)數(shù)，將細(xì)胞懸液按適合的細(xì)胞密度接種于培養(yǎng)瓶/ 板。
(5)之后,加入丫射線輻照后的NIH-3T3細(xì)胞(不同規(guī)格培養(yǎng)瓶/板底面積、接種原代細(xì)胞數(shù)量、添加滋養(yǎng)細(xì)胞 數(shù)量如表1和表2所示)，在培養(yǎng)板/孔中補(bǔ)加乳腺原代上皮細(xì)胞培養(yǎng)基至所需體積，輕輕揺晃混勻，表面消毒后置培養(yǎng)箱，37℃、5% CO2條件培養(yǎng)其他步驟同上。
注意事項(xiàng)：

1.本產(chǎn)品在使用前需平衡至室溫。
2.本產(chǎn)品中含有胎牛血清和原代細(xì)胞專(zhuān)用抗生素，如無(wú)特別需要不用額外再添加血清和雙抗，可直接使用。
3.為保持本產(chǎn)品的理想使用效果，不宜將其過(guò)夜放置于室溫或較高的溫度環(huán)境中。
4.請(qǐng)于保質(zhì)期內(nèi)使用本產(chǎn)品，超出保質(zhì)期，必須放棄使用。
5.原代細(xì)胞初次接種時(shí)會(huì)貼壁較慢和貼壁不牢，若無(wú)必要，盡量減少取出觀察的次數(shù)，建議2-3天一次。
6.傳代消化時(shí)切記不要消化過(guò)度，對(duì)細(xì)胞造成損傷，影響細(xì)胞狀態(tài)。
7.接種細(xì)胞時(shí)注意細(xì)胞密度，不可過(guò)稀或過(guò)密。
8.使用產(chǎn)品時(shí)應(yīng)注意無(wú)菌操作，避免污染。
9.本產(chǎn)品僅用于科研用途，不能用于體外診斷。