簡要描述:SIM SF 培養(yǎng)基為澄清淡黃色透明液體,如果一旦發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基變得渾濁或出現(xiàn)沉淀,請勿使用。
培養(yǎng)基特點:
SIM SF 培養(yǎng)基為澄清淡黃色透明液體,如果一旦發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基變得渾濁或出現(xiàn)沉淀,請勿使用。
保存條件:
2~8℃避光保存,一旦過期,請勿使用。
穩(wěn)定性及保質期:
室溫下一個星期內穩(wěn)定。
自收到之日起, 2~8℃避光保存,六個月內穩(wěn)定。
細胞凍存:
選擇處于對數(shù)生長期的細胞,保證活率大于90%。
制備細胞凍存液:45%新鮮培養(yǎng)基,45%條件培養(yǎng)基,10%DMSO。
200g離心5分鐘,棄去上清。
用細胞凍存液重懸細胞,細胞凍存密度為1.2~2×107/ml/ml。
迅速轉移重懸的細胞至無菌的凍存管中,每管1~2ml。
將凍存管放入程序降溫盒中,-70℃冰箱放置過夜。
若凍存細胞需要長期保存,將其轉移至液氮罐中。
細胞復蘇:
將凍存管迅速轉移至27℃水浴中,進行融化。
將融化的細胞轉至無菌的含5-10ml新鮮培養(yǎng)基的無菌離心管中。
200g低速離心5分鐘,緩慢倒掉上部培養(yǎng)基,不要將沉降的細胞懸起。
用10-20ml新鮮培養(yǎng)基重懸細胞,確保重懸后的細胞密度大于1×106/ml左右。
將重懸的細胞放入無菌培養(yǎng)瓶中,旋蓋擰松,放在搖床中懸浮培養(yǎng)。
當細胞密度生長達到2~4×106/ml時,可以進行傳代,傳代時細胞接種密度為0.8-1×106/ml。